重悬重悬就是“重新悬浮”，具体操作是用适当的缓冲液或培养液将离心或沉降等方法得到的固体（沉淀、细胞、活性物质等等）重新悬浮。

步骤：

1．从液氮中取出一管细胞

2．将冻存管置于37℃水浴中2分钟（或放到管内溶液恰好完全溶解）

3．将细胞转移到一15ml Falcon管中

4．加入5ml ES培养基（用培养基冲洗冻存管）

5．离心3分钟

6．弃上清，用2ml ES培养基重悬细胞，至少吹打10次

7．接种在明胶包被（见下文）的6孔或6cm组织培养皿

8．孵育。