用同一种限制性核酸内切酶分别把DNA分子及要插入的DNA切出黏性末端。然后把带有相同黏性末端的DNA混合在一起，加入DNA连接酶就可以把一段DNA插入到另一段DNA中。之后用选择培养基把所需要的重组DNA筛选出来。因为把要插入的DNA为A，被插入的DNA为B，DNA连接酶连接后出现AA，BB及AB连接，而所需要的是AB连接。